원숭이폭스 바이러스 실시간 PCR 키트

1. 샘플수집:검체는 다음에 따라 멸균 튜브에 수집되어야 합니다.

표준 기술 사양을 갖추고 있습니다.

2. 시약 준비(시약 준비 구역)

키트의 구성품을 꺼내어 실온에서 균형을 맞춰 대기 상태로 사용하세요.

3. 검체처리(검체처리구역)

3.1 핵산 추출

바이러스 DNA 추출 키트의 해당 요구 사항 및 절차에 따라 핵산 추출을 위한 200μL 액체 샘플, 양성 대조 및 음성 대조를 권장합니다.

3.2 동결건조된 분말 용해 및 템플릿 추가

샘플 수에 따라 원숭이폭스 바이러스 동결건조 프리믹스를 준비합니다.하나의 샘플에는 동결건조된 프리믹스 분말이 포함된 PCR 튜브 1개가 필요합니다.음성대조군과 양성대조군은 두 개의 검체로 취급되어야 합니다.

(1) 동결 건조된 프리믹스가 들어 있는 각 PCR 튜브에 용해 용액 15μL를 첨가한 후 추출된 샘플/음성 대조군/양성 대조군을 각 PCR 튜브에 각각 5μL 첨가합니다.

(2) PCR 튜브를 단단히 덮고, 동결건조된 분말이 완전히 용해되어 혼합될 때까지 PCR 튜브를 손으로 가볍게 두드린 다음, 순간 저속 원심분리로 액체를 PCR 튜브 바닥에 모읍니다.

(3) 검출을 위해 일반적인 실시간 PCR 장비를 사용하는 경우 PCR 튜브를 증폭 영역으로 직접 옮깁니다.검출을 위해 BTK-8을 사용하는 경우 다음 작업을 수행해야 합니다. PCR 튜브에서 10μL 액체를 BTK-8의 반응 칩 웰로 옮깁니다.하나의 PCR 튜브는 칩의 하나의 웰에 해당합니다.피펫팅 작업 중에 피펫이 수직으로 90도인지 확인하십시오.에어로졸 장벽 피펫 팁은 적당한 힘으로 웰 중앙에 배치해야 하며, 첫 번째 기어에 도달하면(거품을 방지하기 위해) 피펫을 누르는 것을 중지해야 합니다.Well이 채워진 후 반응 칩 멤브레인을 꺼내 모든 Well을 덮으면 칩이 증폭 감지 영역으로 옮겨집니다.

4. PCR 증폭(검출 영역)

4.1 PCR 튜브/반응칩을 반응탱크에 넣고 각 반응웰의 이름을 해당 순서대로 설정합니다.

4.2 검출 형광 설정: (1) 원숭이폭스 바이러스(FAM);(2) 내부 통제(CY5).

4.3 다음 사이클링 프로토콜을 실행합니다.

ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio의 프로토콜:

 BTK-8 프로토콜:

5. 결과 분석(기기 사용 설명서 참조)

반응 후 결과는 자동으로 저장됩니다.분석하려면 "분석"을 클릭하세요. 그러면 기기가 결과 열에 있는 각 샘플의 Ct 값을 자동으로 해석합니다.음성 및 양성대조 결과는 다음의 "6. 품질관리"에 따른다.

6. 품질 관리

6.1 음성 대조: FAM 채널에서는 Ct가 없거나 Ct>40, 증폭 곡선이 정상인 CY5 채널에서는 Ct≤40입니다.

6.2 양성 대조군: 일반 증폭 곡선이 있는 FAM 채널에서 Ct ≤35, 일반 증폭 곡선이 있는 CY5 채널에서 Ct ≤40.

6.3 위의 모든 기준이 충족되면 결과가 유효합니다.그렇지 않으면 결과가 유효하지 않습니다.

결과 해석

다음과 같은 결과가 가능합니다.

메모: 유효하지 않은 결과가 발생할 경우 검체를 채취하여 다시 검사해야 합니다.